ZP0310 热敏UDG
热敏UDG
Heat-labile UDG
Cat.No.：ZP0310
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-20 ± 5℃保存
复验期：2年
- 产品描述
雅心热敏UDG（Uracil-DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶）由克隆有该酶编码基因（来源于一种嗜冷海洋细菌）的重组大肠杆菌生产，可催化含有尿嘧啶的单链或双链DNA释放游离的尿嘧啶，对RNA无活性。UDG作用后形成的无碱基位点在高温或高pH下容易发生水解裂解。本产品对温度敏感、在50℃以上的温度下可以迅速完全失活，可规避灭活后残留活性的干扰。
适用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR等体系。
可去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
可去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基。
- 产品组分
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组分 |
ZP0310-01（100 U） |
ZP0310-02（500 U） |
ZP0310-03（1000 U） |
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热敏UDG（1 U/μL） |
100 μL |
500 μL |
1 mL |
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- 活性定义
一个单位的UDG酶定义为在25°C下30分钟内降解1 μg含尿嘧啶的双链DNA的量。
- 质量控制
- 无核酸内切酶、核酸外切酶和RNase污染。
- 1 U本产品经qPCR检测， E. coli基因组残留不高于10拷贝。
- 注意事项
- 本产品在多数PCR、RT-PCR反应体系中均有活性。
- 可预先测试本产品是否兼容所用反应体系。
- 实验流程（举例）
（1）配制如下PCR反应液。
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组分 |
体积 |
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ddH2O |
to 50 μL |
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10X PCR Buffer |
5 μL |
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dUTP（10 mM） |
3 μL |
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dATP/dGTP/dCTP（10 mM each） |
1 μL |
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引物1（10 μM） |
2 μL |
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引物2（10 μM） |
2 μL |
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Taq DNA polymerase（5 U/μL） |
0.25 μL |
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热敏UDG（1 U/μL） |
1 μL |
注意：
- 根据实验需要，dUTP的终浓度可在0.2-0.6 mM之间调整。
- 根据实验需要，50 μL反应体系中UDG的用量一般为0.1-1 U。
- 根据实验需要，可选择性掺入dTTP。
（2）程序设置。
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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25℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
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94℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活，模板预变性 |
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95℃ |
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30-35 cycles |
变性 |
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60℃ |
20 sec |
退火 |
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72℃ |
30-60 sec/kb |
延伸 |
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72℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注意：
- 根据实验需要，25℃反应时间可在5-10 min内调整。
- 根据实验需要，可调整PCR反应条件。
