ZP0110 Taq DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶
Taq DNA Polymerase
Cat.No.：ZP0110
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-20 ± 5℃保存
复验期：2年
- 产品描述
Taq DNA Polymerase具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，无3'→5'外切酶活性。雅心
Taq DNA Polymerase由克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的重组大肠杆菌生产。
适用于各种标准PCR过程。PCR产物的3'端带A，可克隆至T载体。
- 产品组分
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组分 |
ZP0110-01（500 U） |
ZP0110-02（5000 U） |
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10X Taq Buffer (Mg2+ plus) |
1.0 mL |
1.0 mL×10 |
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Taq DNA Polymerase（5 U/μL） |
100 μL |
1000 μL |
- 活性定义
1单位（U）指在74℃，30 min内，以大马哈鱼精子DNA为模板/引物，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需要的酶量。
- 质量控制
- 无核酸内切酶和外切酶残留。
- 无RNase残留。
- 10 U本产品经qPCR检测， E. coli基因组残留不高于10拷贝。
- 功能检测：25 μL PCR体系中加入0.5 U本酶，以人基因组DNA为模板进行常规PCR反应。35个循环后将PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，染色后可见有单一的目标条带。
- 注意事项
- Taq DNA Polymerase在室温下也有一定活性，为减少非特异性扩增，建议配制反应体系时在冰上进行。
- 建议酶最后加入。
- 推荐使用方法（举例）
（1）配制反应体系
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组分 |
体积 |
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10X Taq Buffer (Mg2+ plus) |
5 μL |
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dNTP Mixture（2.5mM each） |
4 μL |
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引物1（10 μM） |
2 μL |
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引物2（10 μM） |
2 μL |
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Template DNA |
Optional |
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Taq DNA Polymerase（5 U/μL） |
0.25 μL |
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ddH2O |
To 50 μL |
注意：
- 酶可在0.25 - 0.5 μL之间调整，增加酶量可提高扩增效率，但可能产生非特异性产物。
- 50 μL体系推荐模板用量
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模板种类 |
用量 |
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基因组DNA |
10-100 ng |
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质粒DNA |
0.01-10 ng |
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λDNA |
0.5-10 ng |
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cDNA |
1-5 μL（不超过反应体系的1/10） |
（2）程序设置
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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95℃ |
30 sec - 5 min |
1 |
预变性 |
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94℃ |
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30 cycles |
变性 |
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50-65℃ |
15 sec |
退火 |
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72℃ |
60 sec/kb |
延伸 |
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72℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注意：
- 预变性时间与模板复杂程度相关。
- 退火温度需根据引物的Tm值调整。
- 根据实验需要，可调整为两步法，即退火和延伸合为一步，温度采用60-68℃。
- 冷启动扩增
由于Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系需在冰上进行配制，冷启动方法使扩增更加精确，将非特异性扩增最小化。这是一种无需特殊的酶和额外试剂的简易操作方法：
（1）使用前将所有试剂放在冰上
（2）在冰上配制反应体系，酶最后加入
（3）设置PCR程序，冷启动的PCR条件无需改变
（4）将反应管放在PCR仪中并立即启动程序
