Re15-01 Kex2 底物

Kex2 底物

BOC-GLN-ARG-ARG-pNA (Boc-QRR-pNA) 

性状：白色、类白色或类黄色粉末，

保存条件：-20℃避光保存。

BOC-GLN-ARG-ARG-pNA (Boc-QRR-pNA) 的结构

分子量：679.80

溶解方法：

（1）底物原液制备：

精密称取Boc-QRR-pNA 14mg，加10ml纯水溶解，或相应质量，按照以上比例加纯水溶解成相应浓度，为底物原液。按取用量可分装置-20℃保存一个月，底物原液2h内使用完毕。

（2）底物溶液制备：

取底物原液10ml或相应体积，用测活缓冲液稀释成100ml或相应体积。为底物溶液；底物溶液2h内使用完毕。

注意：现配现用。

取光程为1cm的玻璃比色皿，加入3.0ml恒温于25.0℃±0.5℃的底物溶液，在405nm的波长处测定吸光度，并调零。另取底物溶液（恒温于25.0℃±0.5℃）3.0ml，加入供试品溶液0.01ml，混匀，立即计时，使比色皿内的温度保持在25.0℃±0.5℃，在405nm波长处，每30秒钟读取吸光度，共5min，以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，每30秒钟吸光度的改变应恒定在0.005～0.015之间，呈线性关系的时间不得少于3 分钟。取直线部分按下式计算活性：Kex2蛋白酶活性U/ml =

式中：

AT为终止的吸光度；

A0为起始的吸光度；

T为AT至A0读数的时间，min；

L为比色皿光程，1cm；

3.01为反应液总体积，ml；

0.01为供试品溶液体积，ml；

10.2为pNA的摩尔吸光系数，单位为mL/（μmol·cm）

Df为稀释因子