显色法RT-LAMP试剂盒（含UDG）
Colorimetric RT-LAMP Kit（UDG plus）
显色法RT-LAMP试剂盒（含UDG）
Cat.No.：ZP08
储存温度：-25 ~ -15 ℃保存
1.产品描述
本产品Buffer中包含dNTPs（dUTP plus）、Mg2+等扩增必须组分，同时包含pH敏感指示剂，随着扩增反应的进行，溶液颜色从玫红色变为黄色，可肉眼判断扩增结果。试剂盒中含有无甘油Reverse Transcriptase、Bst DNA polymerase、RNase Inhibitor和UDG等，可用于冻干反应。本产品为RT-LAMP提供了便捷的一步法解决方案，可兼容不同样品类型，适用于多种检测方法。通过优化酶的性能和缓冲体系，可在一管中实现由RNA反转录为cDNA并大量扩增目标产物，提高了检测通量，降低了污染的风险，避免假阳性。
2.产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
ZP08-01 （100 rxns） |
ZP08-01 （1000 rxns） |
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ZP08-A |
2.5× Reaction Buffer（pH sensitive） |
1ml |
10ml |
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ZP08-B |
无甘油RT酶Mix |
30 μl |
300 μl |
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ZP08-C |
无甘油Bst酶 |
50 μl |
500 μl |
注意：本试剂使用的是pH指示剂法，不可长期接触空气，防止吸附空气中的CO2使试剂变酸，影响实验结果判读。
可根据客户需求进行规格定制。
3.质量控制
- ►无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
- ►无核酸残留。
4.注意事项
- ►样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
- ►实验过程中注意洁净，并使用RNase-free、DNase-free的枪头、EP管等。
5.RT-LAMP实验流程（举例）
(1)样品制备
经核酸提取后的样本可直接加入反应体系中。
(2)引物制备
建议使用包含所有6种LAMP引物（3对）的10× Primer Mix。
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Primer |
10×储存浓度 |
1×工作浓度 |
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FIP/BIP |
16 μM |
1.6 μM |
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F3/B3 |
2 μM |
0.2 μM |
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Loop F/B |
4 μM |
0.4 μM |
注意：用无核酸酶水配制引物，尽量避免使用TE buffer等可能引入额外试剂的缓冲液。
(3)配制反应体系
将产品室温解冻后放置于冰上。简短漩涡震荡或倒置几次后瞬时离心，确保所有液体混合均匀且落到管底。
按如下体系配制反应液
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组分 |
体积 |
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无核酸酶ddH2O |
To 25 μl |
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2.5× Reaction Buffer（pH sensitive） |
10 μl |
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Bst酶 |
0.5 μl |
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RT酶Mix |
0.3 μl |
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Primer Mix（10×） |
2.5 μl |
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Target DNA/RNA |
X |
注意：
- 1)可以根据实验需要等比例放大或缩小体系，但尽量不高于50 μl，不低于10 μl。
- 2)可以根据实验需求调整模板量（推荐1 ng - 1 μg），并调整ddH2O的体积至总体积。
- 3)模板最后加入，并混匀离心。观察反应溶液的颜色是否为玫红色，表明试剂可用。
- 4)为避免污染，推荐在分别的超净台中配制组分和添加模板，并设置阴性对照。
(4)反应条件
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温度 |
时间 |
目的 |
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25 - 37 ℃ |
2-5 min |
降解含U模板 |
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60 - 65 ℃ |
30 min |
等温扩增 |
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85 ℃ |
5 min |
终止反应 |
注意：
- 1)推荐使用PCR仪进行操作，如采用水浴锅请严格控制温度。
- 2)反应温度可以根据引物的Tm值进行调整。
- 3)根据实验需要可以适当延长反应时间（时间不可过长）以获得较明显的显色。
(5)反应条件
反应结束后取出反应管，待降温至室温后，进行颜色观察，建议采用白板作为背景。如果反应液为玫红色，则为阴性结果；如果反应液为黄色，则为阳性结果。
注意：
- ►反应时间不可过长，易出现假阳性。
- ►反应管不可开盖，易造成气溶胶污染，影响后续实验结果。
