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显色法RT-LAMP试剂盒(UDG plus)

Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mix

显色法RT-LAMP试剂盒(UDG plus

 

Cat.No.ZQP03

储存温度:-25 ~ -15 ℃保存

 

 

1.产品描述

本产品将Reverse TranscriptaseBst DNA polymeraseRNase InhibitorUDG整合至优化的Buffer中,同时包含dNTPsdUTP plus)、Mg2+等扩增必须组分,为RT-LAMP提供了便捷的一步法解决方案,可兼容不同样品类型,适用于多种检测方法。通过优化酶的性能和缓冲体系,可在一管中实现由RNA反转录为cDNA并大量扩增目标产物,提高了检测通量,降低了污染的风险,避免假阳性。此外,产品中含有pH敏感指示剂,随着扩增反应的进行,溶液颜色从玫红色变为黄色,可肉眼判断扩增结果。

 

2.产品组分

组分

ZP06-01

100 rxns

ZP06-02

1000 rxns

Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mixa

1.25 ml

12.5 ml

注意:本试剂使用的是pH指示剂法,不可长期接触空气,防止吸附空气中的CO2使试剂变酸,影响实验结果判读。

 

3.质量控制

  • ►无核酸内切酶外切酶RNase残留
  • ►无核酸残留。

 

4.注意事项

  • ►样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
  • ►实验过程中注意洁净,并使用RNase-freeDNase-free的枪头、EP管等。

 

5.RT-LAMP实验流程(举例

(1)样品制备

经核酸提取后的样本可直接加入反应体系中。

(2)引物制备

建议使用包含所有6LAMP引物(3对)的10× Primer Mix

Primer

10×储存浓度

1×工作浓度

FIP/BIP

16 μM

1.6 μM

F3/B3

2 μM

0.2 μM

Loop F/B

4 μM

0.4 μM

注意:用无核酸酶水配制引物,尽量避免使用TE buffer等可能引入额外试剂的缓冲液。

 

(3)配制反应体系

将产品室温解冻后放置于冰上。简短漩涡震荡或倒置几次后瞬时离心,确保所有液体混合均匀且落到管底。

 

按如下体系配制反应液

组分

体积

无核酸酶ddH2O

9 μl

Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mix

12.5 μl

Primer Mix10×

2.5 μl

Target DNA/RNA

1 μl

总体积

25 μl

注意:

  1. 1)可以根据实验需要等比例放大或缩小体系,但尽量不高于50 μl,不低于10 μl
  2. 2)可以根据实验需求调整模板量(推荐1 ng - 1 μg),并调整ddH2O的体积至总体积。
  3. 3)模板最后加入,并混匀离心。观察反应溶液的颜色是否为玫红色,表明试剂可用。
  4. 4)为避免污染,推荐在分别的超净台中配制组分和添加模板,并设置阴性对照。

(4)反应条件

温度

时间

目的

25 - 37

2-5 min

降解含U模板

60 - 65

30 min

等温扩增

85

5 min

终止反应

注意:

  1. 1)推荐使用PCR仪进行操作,如采用水浴锅请严格控制温度。
  2. 2)反应温度可以根据引物的Tm值进行调整。
  3. 3)根据实验需要可以适当延长反应时间(时间不可过长)以获得较明显的显色。

(5)反应条件

反应结束后取出反应管,待降温至室温后,进行颜色观察,建议采用白板作为背景。如果反应液为玫红色,则为阴性结果;如果反应液为黄色,则为阳性结果。

注意:

  1. ►反应时间不可过长,易出现假阳性。
  2. ►反应管不可开盖,易造成气溶胶污染,影响后续实验结果。

 

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