显色法RT-LAMP试剂盒（UDG plus）

Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mix

显色法RT-LAMP试剂盒（UDG plus）

 

Cat.No.：ZQP03

储存温度：-25 ~ -15 ℃保存

 

 

1.产品描述

本产品将Reverse Transcriptase、Bst DNA polymerase、RNase Inhibitor和UDG整合至优化的Buffer中，同时包含dNTPs（dUTP plus）、Mg²⁺等扩增必须组分，为RT-LAMP提供了便捷的一步法解决方案，可兼容不同样品类型，适用于多种检测方法。通过优化酶的性能和缓冲体系，可在一管中实现由RNA反转录为cDNA并大量扩增目标产物，提高了检测通量，降低了污染的风险，避免假阳性。此外，产品中含有pH敏感指示剂，随着扩增反应的进行，溶液颜色从玫红色变为黄色，可肉眼判断扩增结果。

 

2.产品组分

组分	ZP06-01 （100 rxns）	ZP06-02 （1000 rxns）
Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mixa	1.25 ml	12.5 ml

注意：本试剂使用的是pH指示剂法，不可长期接触空气，防止吸附空气中的CO₂使试剂变酸，影响实验结果判读。

 

3.质量控制

• ►无核酸内切酶、外切酶和RNase残留。
• ►无核酸残留。

 

4.注意事项

• ►样品使用前请混匀并瞬时离心至反应管底部。
• ►实验过程中注意洁净，并使用RNase-free、DNase-free的枪头、EP管等。

 

5.RT-LAMP实验流程（举例）

(1)样品制备

经核酸提取后的样本可直接加入反应体系中。

(2)引物制备

建议使用包含所有6种LAMP引物（3对）的10× Primer Mix。

Primer	10×储存浓度	1×工作浓度
FIP/BIP	16 μM	1.6 μM
F3/B3	2 μM	0.2 μM
Loop F/B	4 μM	0.4 μM

注意：用无核酸酶水配制引物，尽量避免使用TE buffer等可能引入额外试剂的缓冲液。

 

(3)配制反应体系

将产品室温解冻后放置于冰上。简短漩涡震荡或倒置几次后瞬时离心，确保所有液体混合均匀且落到管底。

 

按如下体系配制反应液

组分	体积
无核酸酶ddH2O	9 μl
Colorimetric RT-LAMP 2× Master Mix	12.5 μl
Primer Mix（10×）	2.5 μl
Target DNA/RNA	1 μl
总体积	25 μl

注意：

1. 1)可以根据实验需要等比例放大或缩小体系，但尽量不高于50 μl，不低于10 μl。
2. 2)可以根据实验需求调整模板量（推荐1 ng - 1 μg），并调整ddH₂O的体积至总体积。
3. 3)模板最后加入，并混匀离心。观察反应溶液的颜色是否为玫红色，表明试剂可用。
4. 4)为避免污染，推荐在分别的超净台中配制组分和添加模板，并设置阴性对照。

(4)反应条件

温度	时间	目的
25 - 37 ℃	2-5 min	降解含U模板
60 - 65 ℃	30 min	等温扩增
85 ℃	5 min	终止反应

注意：

1. 1)推荐使用PCR仪进行操作，如采用水浴锅请严格控制温度。
2. 2)反应温度可以根据引物的Tm值进行调整。
3. 3)根据实验需要可以适当延长反应时间（时间不可过长）以获得较明显的显色。

(5)反应条件

反应结束后取出反应管，待降温至室温后，进行颜色观察，建议采用白板作为背景。如果反应液为玫红色，则为阴性结果；如果反应液为黄色，则为阳性结果。

注意：

1. ►反应时间不可过长，易出现假阳性。
2. ►反应管不可开盖，易造成气溶胶污染，影响后续实验结果。