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T7 RNA聚合酶

T7 RNA Polymerase

T7 RNA聚合酶

Cat.No.MR02

来源:基因工程生产,大肠杆菌表达

储存温度:-25 ~ -15 ℃保存

有效期:2

 

1.产品描述

雅心T7 RNA Polymerase由克隆有噬菌体T7 RNA聚合酶编码基因的重组大肠杆菌生产,对T7启动子有高度的特异性,是一种以DNA为模板合成互补RNA5'3' RNA聚合酶。本产品可用双链线性平头末端或5'突出末端DNA为模板,如线性化的质粒或PCR产物。

用于制备放射性标记的RNA探针;用于体外转录合成功能性RNA;以含Cap类似物的引物合成加帽的mRNA

 

2.产品组分

组分

MR02-015000 U

MR02-0225000 U

10 × Transcription Buffer

1 ml

5 ml

T7 RNA Polymerase50 U/μl

100 μl

500 μl

 

3.活性定义

1单位(U)指在37 条件下1小时内将1 n molATP掺入酸不溶物所需要的酶量。

 

4.质量控制

  • RNA聚合酶、DNaseRNase污染;无宿主DNA和蛋白污染。

 

5.注意事项

  • 1)体外转录时需使用高质量、高纯度且RNase-free的模板DNA
  • 2)模板DNA上游需含有T7启动子序列。
  • 3)反应体系中可添加无机焦磷酸酶提高转录效率。

 

6.推荐使用方法(举例)

1)配制如下反应混合液

组分

用量

终浓度

10×Transcription Buffer

2 μl

ATP/UTP/GTP/CTP100 mM each

0.4 μL each

2 mM

T7 RNA Polymerase50 U/μl

1 μl

2.5 U/μl

RNase inhibitor40 U/μl

1 μl

2 U/μl

Template DNA

0.1 - 1 μg

 

ddH2O

To 20 μl

 

注意:

  1. 1)T7 RNA 聚合酶可在2.5 - 5 U/μl之间调整,RNase inhibitor可在1 - 2 U/μl之间调整。
  2. 2)由于反应体系中含有亚精胺,易使DNA模板沉淀,故DNA模板需最后加入。
  3. 3)建议室温下配制反应体系。
  4. 4)RNase inhibitorNTP Mixtures 可购买本公司相应产品。
  5.  

237 反应1-2 h(可根据需求,适当延长反应时间)。

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