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UDG

热敏UDG

Heat-labile UDG

热敏UDG

 

Cat.No.ZP03

来源:基因工程生产,大肠杆菌表达

储存温度:-25 ~ -15 ℃保存

有效期:2

 

1.产品描述

雅心Heat-labile UDGUracil-DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA糖基化酶)由克隆有该酶编码基因(来源于一种嗜冷海洋细菌)的重组大肠杆菌生产,可催化含有尿嘧啶的单链或双链DNA释放游离的尿嘧啶,对RNA无活性。UDG作用后形成的无碱基位点在高温或高pH下容易发生水解裂解。本产品对温度敏感、50 以上的温度下可以迅速完全失活,可规避灭活后残留活性的干扰。

适用于PCRqPCRRT-PCRRT-qPCR等体系。

可去除含dUPCR产物气溶胶污染。

去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基。 

 

2.产品组分

组分

ZP03-01100 U

ZP03-02500 U

Heat-labile UDG1 U/μ

100 μl

500 μl

 

3.活性定义

1单位(U)指25 ℃10 min内能够降解200-300 ngdUdsDNA所需的酶量。

 

4.质量控制

  • ►无核酸内切酶、核酸外切酶和RNase污染。

 

5.注意事项

  • ►本产品在多数PCRRT-PCR反应体系中均有活性。
  • ►可预先测试本产品是否兼容所用反应体系。

 

6.实验流程(举例)

1)配制如下PCR反应液。

组分

体积

ddH2O

to 50 μl

10×PCR Bufferwith 15 mM MgCl2

5 μl

dUTP10 mM

3 μl

dATP/dGTP/dCTP10 mM each

1 μl

引物110 μM

2

引物210 μM

2

Taq DNA polymerase5 U/μl

0.5

Heat-labile UDG1 U/μl

1

 

注意:

  1. 1)根据实验需要,dUTP的终浓度可在0.2-0.6 mM之间调整。
  2. 2)根据实验需要,50 μL反应体系中UDG的用量一般为0.1-1 U
  3. 3)根据实验需要,Mg2+的终浓度可在1.5-3 mM之间调整。
  4. 4)根据实验需要,可选择性掺入dTTP

 

2)程序设置。

温度

时间

循环数

目的

25 ℃

10 min

1

降解含U模板

94

2 min

1

UDG酶失活,模板预变性

95

10 sec

 

变性

60

20 sec

30-35

退火

72

30-60 sec/kb

 

延伸

72

5 min

1

终延伸

注意:

  1. 1)根据实验需要,25 ℃反应时间可在5-10 min内调整。
  2. 2)根据实验需要,可调整PCR反应条件。
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