热敏UDG
Heat-labile UDG
热敏UDG
Cat.No.:ZP03
来源:基因工程生产,大肠杆菌表达
储存温度:-25 ~ -15 ℃保存
有效期:2年
1.产品描述
雅心Heat-labile UDG(Uracil-DNA Glycosylase,尿嘧啶-DNA糖基化酶)由克隆有该酶编码基因(来源于一种嗜冷海洋细菌)的重组大肠杆菌生产,可催化含有尿嘧啶的单链或双链DNA释放游离的尿嘧啶,对RNA无活性。UDG作用后形成的无碱基位点在高温或高pH下容易发生水解裂解。本产品对温度敏感、在50 ℃以上的温度下可以迅速完全失活,可规避灭活后残留活性的干扰。
适用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR等体系。
可去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
可去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基。
2.产品组分
组分 |
ZP03-01(100 U) |
ZP03-02(500 U) |
Heat-labile UDG(1 U/μ) |
100 μl |
500 μl |
3.活性定义
1单位(U)指25 ℃,10 min内能够降解200-300 ng含dU的dsDNA所需的酶量。
4.质量控制
- ►无核酸内切酶、核酸外切酶和RNase污染。
5.注意事项
- ►本产品在多数PCR、RT-PCR反应体系中均有活性。
- ►可预先测试本产品是否兼容所用反应体系。
6.实验流程(举例)
(1)配制如下PCR反应液。
组分 |
体积 |
ddH2O |
to 50 μl |
10×PCR Buffer(with 15 mM MgCl2) |
5 μl |
dUTP(10 mM) |
3 μl |
dATP/dGTP/dCTP(10 mM each) |
1 μl |
引物1(10 μM) |
2 |
引物2(10 μM) |
2 |
Taq DNA polymerase(5 U/μl) |
0.5 |
Heat-labile UDG(1 U/μl) |
1 |
注意:
- 1)根据实验需要,dUTP的终浓度可在0.2-0.6 mM之间调整。
- 2)根据实验需要,50 μL反应体系中UDG的用量一般为0.1-1 U。
- 3)根据实验需要,Mg2+的终浓度可在1.5-3 mM之间调整。
- 4)根据实验需要,可选择性掺入dTTP。
(2)程序设置。
温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
25 ℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
94 ℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活,模板预变性 |
95 ℃ |
|
|
变性 |
60 ℃ |
20 sec |
30-35 |
退火 |
72 ℃ |
30-60 sec/kb |
|
延伸 |
72 ℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注意:
- 1)根据实验需要,25 ℃反应时间可在5-10 min内调整。
- 2)根据实验需要,可调整PCR反应条件。