热敏UDG
Heat-labile UDG
热敏UDG
Cat.No.：ZP03
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-25 ~ -15 ℃保存
有效期：2年
1.产品描述
雅心Heat-labile UDG（Uracil-DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA糖基化酶）由克隆有该酶编码基因（来源于一种嗜冷海洋细菌）的重组大肠杆菌生产，可催化含有尿嘧啶的单链或双链DNA释放游离的尿嘧啶，对RNA无活性。UDG作用后形成的无碱基位点在高温或高pH下容易发生水解裂解。本产品对温度敏感、在50 ℃以上的温度下可以迅速完全失活，可规避灭活后残留活性的干扰。
适用于PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR等体系。
可去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
可去除单链或双链 DNA 尿嘧啶碱基。
2.产品组分
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组分 |
ZP03-01（100 U） |
ZP03-02（500 U） |
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Heat-labile UDG（1 U/μ） |
100 μl |
500 μl |
3.活性定义
1单位（U）指25 ℃，10 min内能够降解200-300 ng含dU的dsDNA所需的酶量。
4.质量控制
- ►无核酸内切酶、核酸外切酶和RNase污染。
5.注意事项
- ►本产品在多数PCR、RT-PCR反应体系中均有活性。
- ►可预先测试本产品是否兼容所用反应体系。
6.实验流程（举例）
（1）配制如下PCR反应液。
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组分 |
体积 |
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ddH2O |
to 50 μl |
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10×PCR Buffer（with 15 mM MgCl2） |
5 μl |
|
dUTP（10 mM） |
3 μl |
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dATP/dGTP/dCTP（10 mM each） |
1 μl |
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引物1（10 μM） |
2 |
|
引物2（10 μM） |
2 |
|
Taq DNA polymerase（5 U/μl） |
0.5 |
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Heat-labile UDG（1 U/μl） |
1 |
注意：
- 1)根据实验需要，dUTP的终浓度可在0.2-0.6 mM之间调整。
- 2)根据实验需要，50 μL反应体系中UDG的用量一般为0.1-1 U。
- 3)根据实验需要，Mg2+的终浓度可在1.5-3 mM之间调整。
- 4)根据实验需要，可选择性掺入dTTP。
（2）程序设置。
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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25 ℃ |
10 min |
1 |
降解含U模板 |
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94 ℃ |
2 min |
1 |
UDG酶失活，模板预变性 |
|
95 ℃ |
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变性 |
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60 ℃ |
20 sec |
30-35 |
退火 |
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72 ℃ |
30-60 sec/kb |
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延伸 |
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72 ℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注意：
- 1）根据实验需要，25 ℃反应时间可在5-10 min内调整。
- 2）根据实验需要，可调整PCR反应条件。
