热启动Taq DNA聚合酶
HotStart Taq DNA Polymerase
热启动Taq DNA聚合酶
Cat.No.：ZP02
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-25 ~ -15 ℃保存
有效期：2年
1.产品描述
雅心HotStart Taq DNA Polymerase是雅心Taq和抗Taq单克隆抗体经最佳比例混合而成的热启动Taq酶。本制品中Taq酶和抗Taq抗体有很强的亲和力，且在65 ℃时仍处于完全封闭状态，可在样品配制和体系升温阶段抑制由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应最初的DNA预变性阶段已变性，不会影响后续PCR反应的正常进行。
适用于各种基于Taq DNA聚合酶的热启动PCR和qPCR，是基于qPCR分子诊断试剂的首选用热启动Taq酶，保证PCR体系具有极高的扩增灵敏度和特异性。
2.产品组分
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组分 |
ZP02-01（250 U） |
ZP02-02（500 U） |
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10×HotStart Taq Buffer (Mg2+ plus) |
1.0 ml |
1.0 ml×2 |
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dNTP Mixture（10 mM each） |
1.0 ml |
1.0 ml×2 |
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HotStart Taq DNA Polymerase（5 U/μl） |
50 μl |
100 μl |
3.活性定义
1单位（U）指在74℃，30min内，以大马哈鱼精子DNA为模板/引物，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需要的酶量。
4.质量控制
- 1）无核酸内切酶和外切酶残留。
- 2）无RNase残留。
- 3）功能检测：25 μl PCR体系中加入0.5 U本酶，以人基因组DNA为模板进行常规PCR反应。35个循环后将PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，染色后
- 4）可见有单一的目标条带。
5.注意事项
- ►所用试剂、耗材以及实验操作区需洁净，避免污染。
6.推荐使用方法（举例）
（1）配制反应体系
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组分 |
体积 |
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10×HotStart Taq Buffer (Mg2+ plus) |
5 μl |
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dNTP Mixture（2.5mM each） |
4 μl |
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Primer1（10 μM） |
2 μl |
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Primer2（10 μM） |
2 μl |
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Template DNA |
Optional |
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HotStart Taq DNA Polymerase（5 U/μl） |
0.5 μl |
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ddH2O |
To 50 μl |
注意：
- 1）根据实验需要，酶可在0.25 - 0.5 μl之间调整。
- 2）体系中Mg2+终浓度为2 mM。根据实验需要，可用25 mM MgCl2，以0.2 - 0.5 mM为间隔向上摸索。
- 3）所用试剂加入前请充分融化并混匀。
- 4）50 μl体系推荐模板用量
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模板种类 |
用量 |
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基因组DNA |
10-100 ng |
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质粒DNA |
0.01-10 ng |
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λDNA |
0.5-10 ng |
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cDNA |
1-5 μl（不超过反应体系的1/10） |
（2）程序设置
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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95 ℃ |
30 sec - 5 min |
1 |
预变性 |
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94 ℃ |
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变性 |
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50 - 65 ℃ |
15 sec |
｝ 30 cycles |
退火 |
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72 ℃ |
60 sec/kb |
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延伸 |
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72 ℃ |
5 min |
1 |
终延伸 |
注意：
- 1）预变性时间与模板复杂程度相关。
- 2）退火温度需根据引物的Tm值调整，退火温度过低会导致非特异性扩增。退火时间可在10-30 sec之间调节。
- 3）根据实验需要，可调整为两步法，即退火和延伸合为一步，温度采用60-68 ℃。
