Taq DNA聚合酶

Taq DNA Polymerase

Taq DNA聚合酶

 

Cat.No.：ZP01

来源：基因工程生产，大肠杆菌表达

储存温度：-25 ~ -15 ℃保存

有效期：2年

 

1.产品描述

Taq DNA Polymerase具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，无3'→5'外切酶活性。雅心Taq DNA Polymerase由克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的重组大肠杆菌生产。

适用于各种标准PCR过程。PCR产物的3'端带A，可克隆至T载体。

 

2.产品组分

组分	ZP01-01（500 U）	ZP01-02（5000 U）
10×Taq Buffer (Mg2+ plus)	1.0 mL×3
dNTP Mixture（2.5mM each）	2 mL	10 × ZP01-01
Taq DNA Polymerase（5 U/μL）	100 μL

 

3.活性定义

1单位（U）指在74℃，30min内，以大马哈鱼精子DNA为模板/引物，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需要的酶量。

 

4.质量控制

• ►无核酸内切酶和外切酶残留。
• ►无RNase残留。
• ►功能检测：25 μL PCR体系中加入0.5 U本酶，以人基因组DNA为模板进行常规PCR反应。35个循环后将PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，染色后可见有单一的目标条带。

 

5.注意事项

• ►Taq DNA Polymerase在室温下也有一定活性，为减少非特异性扩增，建议配制反应体系时在冰上进行。
• 建议酶最后加入。

 

6.推荐使用方法（举例）

（1）配制反应体系

组分	体积
10×Taq Buffer (Mg2+ plus)	5 μL
dNTP Mixture（2.5mM each）	4 μL
Primer1（10 μM）	2 μL
Primer2（10 μM）	2 μL
Template DNA	Optional
Taq DNA Polymerase（5 U/μL）	0.25 μL
ddH2O	To 50 μL

注意：

1）酶可在0.25 - 0.5 μL之间调整，增加酶量可提高扩增效率，但可能产生非特异性产物。

2）50 μL体系推荐模板用量

 

模板种类	用量
基因组DNA	10-100 ng
质粒DNA	0.01-10 ng
λDNA	0.5-10 ng
cDNA	1-5 μL（不超过反应体系的1/10）

 

（2）程序设置

温度	时间	循环数	目的
95 ℃	30 sec - 5 min	1	预变性
94 ℃	15 sec		变性
50 - 65 ℃	15 sec	} 30 cycles	退火
72 ℃	60 sec/kb		延伸
72 ℃	5 min	1	终延伸

注意：

1. 1)预变性时间与模板复杂程度相关。
2. 2)退火温度需根据引物的Tm值调整。
3. 3)根据实验需要，可调整为两步法，即退火和延伸合为一步，温度采用60-68 ℃。
4.  

7.冷启动扩增

由于Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系需在冰上进行配制，冷启动方法使扩增更加精确，将非特异性扩增最小化。这是一种无需特殊的酶和额外试剂的简易操作方法：

（1）使用前将所有试剂放在冰上

（2）在冰上配制反应体系，酶最后加入

（3）设置PCR程序，冷启动的PCR条件无需改变

（4）将反应管放在PCR仪中并立即启动程序