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RT_副本

M-MuLV反转录酶(RNase H-)

M-MuLV Reverse TranscriptaseRNase H-

M-MuLV反转录酶RNase H-

 

Cat.No.:ZP04

来源:基因工程生产,大肠杆菌表达

储存温度:-25 ~ -15 ℃保存

有效期:2

 

1.产品描述

莫洛尼氏鼠白血病病毒(M-MuLV)反转录酶是一种RNA介导的DNA聚合酶。该酶能以 RNA或单链DNA为模板由引物起始合成一条互补的DNA链。雅心Reverse Transcriptase由克隆有M-MuLV Reverse Transcriptase编码基因的重组大肠杆菌生产,通过基因重组技术使RNase H活性缺失,延伸能力增强,热稳定性提高,可耐受50 ℃的反应温度

用于动植物和微生物RNA逆转录反应、cDNA文库的构建以及RT-PCR等反应。

 

2.产品组分

组分

MRT01-014000 U

MRT01-0210000 U

5×RT Buffer

100 μl

300 μl

Reverse Transcriptase200 U/μL

20 μl

50 μl

 

3.活性定义

1单位(U)指以 polyrA)为模板、oligodT)为引物,在37℃条件下,10分钟内催化1 nmoldTTP掺入形成酸不溶物所需要的酶量。

 

4.质量控制

  • ►无核酸内切酶和核酸外切酶活性,无RNase活性。

 

5.注意事项

  • ►避免RNase污染:保持实验区域洁净;操作时穿戴干净的手套、口罩;所用试剂和耗材均需保证RNase free
  • ►在冰上配制反应液防止RNA降解。

 

6.常规第一链cDNA合成反应(举例)

1RNA模板变性:有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。

组分

体积

RNase free ddH2O

To 13 μl

Oligo(dT)1850 μM

1 μl

or Random Primers50 μM

1 μl

or Gene Specific Primers2 μM

1 μl

total RNA

10 pg - 5 μg

or poly A+ RNA

10 pg - 0.5 μg

65 ℃加热5min,立即置于冰水浴骤冷2 min,瞬时离心后加入下表反应体系。

 

2)逆转录反应体系配制:注意轻柔吹打混匀

组分

体积

上一步混合液

13 μl

5×RT Buffer

4 μl

dNTP Mixture(各10 mM

1 μl

Reverse Transcriptase200 U/μl

1 μl

RNase inhibitor40 U/μl

1 μl

 

3)程序设置

温度

时间

25 

5 min

42 

30-60 min

85 

5 min

注意:

1)使用Random Primers 时,需25 孵育 5 min;使用 Oligo (dT)18  Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用 42 。对于高 GC 含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50 

385 加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

4产物可立即用于后续反应,或-20 ℃短期保存,若需长期保存,建议分装后于-80 ℃保存,避免反复冻融。

 

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