TEV23 重组TEV蛋白酶
重组TEV蛋白酶
Recombinant TEV Protease
产品编码：TEV23
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：-20±5℃
有效期：2年
- 产品描述
雅心重组TEV蛋白酶 ( TEV Protease) 来源于烟草蚀纹病毒 (Tobacco Etch Virus, TEV)，经由基因工程改造，由克隆有该酶编码基因的大肠杆菌生产。TEV酶是一种高度特异性的蛋白酶，能够特异性地识别七个氨基酸序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-(Gly/Ser)，并在Gln和(Gly/Ser) 残基之间进行切割, 常用于去除融合蛋白的His, MBP, GST或其它标签。本产品带有His标签，方便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除TEV蛋白酶。
|
组分 |
组分编号 |
1,000 U |
10,000 U |
|
TEV Protease, 1,000 U |
TEV231KU-A |
0.1 mL(10,000 U/mL) |
|
|
TEV Protease, 10,000 U |
TEV2310KU-A |
|
1 mL(10,000 U/mL) |
|
10X Reaction Buffer |
TEV23-B |
1 mL |
1 mLx5 |
- 产品组分
注：客户收到的重组TEV蛋白酶的组分A即TEV Protease,其组分编号与货号对应。需要大规格可定制。
- 活性定义
1单位（U）定义为在1X Reaction buffer（50 mM Tris，0.5 mM EDTA，1 mM DTT (pH 7.5 @ 25°C)）中，30℃ 条件下，1小时内切割≥90% 的2 μg融合蛋白所需的酶量。
- 应用举例
|
组分 |
用量 |
|
10X Reaction Buffer |
5 μL |
|
融合蛋白 (15 μg) |
X μL |
|
TEV Protease |
1 μL |
|
H2O |
To 50 μL |
注1：把15 μg的融合蛋白（体积 X μL）和5 μL的10X Reaction Buffer加纯净水至49 μL，最后再加入1 μL的TEV蛋白酶, 在30℃下酶切1小时。
注2：如果底物在30℃不稳定，则可以考虑在4℃过夜酶切，而酶量和底物的重量比可以介于1:100或1:200 间去测试与调整。
- 注意事项
- TEV蛋白酶最佳酶切温度为30℃，当温度高于37℃时，酶活会急剧下降。在实际操作中，为了尽量保持目标蛋白的结构和生物活性，建议在4℃下进行TEV酶切过夜。TEV蛋白酶在pH 6.0-9.0范围内具有活性，但当pH小于或等于5.0时会失去酶活性。
- TEV 蛋白酶的酶活不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF、AEBSF、Aprotinin、Pepstatin和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV蛋白酶的活性。
- TEV蛋白酶在300 mM咪唑中仍能保有高活性。因此，对于许多通过镍柱纯化带有His标签的融合蛋白，可以直接将TEV蛋白酶加入含有高浓度咪唑的蛋白溶液中，在4℃下进行透析以去除咪唑的同时进行过夜酶切。酶切后带有His标签的TEV蛋白酶以及切下来的His标签都可以通过镍柱结合而与目标蛋白分离。
- 蛋白的储存缓冲液为50 mM Tris, 250 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 50% Glycerol (pH 7.5 @ 25°C)
