REK08 重组肠激酶

CAS：9014-74-8  EC：3.4.21.9

 

【重组肠激酶｜产品简介】

 

酶切位点：肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸（DDDDK）。

氨基酸序列：雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。

酶学性质：肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。

基本特性：该酶经HPLC纯化，纯度高，特异性高，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。

 

【重组肠激酶｜产品特性】

 

备注：1U定义为在25℃，12h~16h之内，将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。

 

【重组肠激酶｜使用方法】

25℃酶切条件：

反应体系：

反应条件：25℃过夜酶切，或完全酶切需16-24h，用SDS-PAGE检测酶切效果。

结果验证：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反应温度是25℃，酶切不同时间梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）

 

4℃低温酶切条件：4℃能对底物进行有效酶切，但需要将酶切时间延长至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。

酶切结果验证：使用0.1 U本品酶切50 ug融合蛋白底物，反应温度是4℃，酶切不同时间梯度（8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h）

酶切优化和放大：

优化：可以对酶切条件进行优化，例如缓冲液 pH，融合蛋白浓度，EK的量，以及酶切时间，使融合蛋白能在稳定条件下被酶切，用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大，用 SDS-PAGE 检测酶切效果。

去除重组肠激酶的方法：使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析（例如 sigma T0637）去除重组肠激酶。

 

【重组肠激酶｜储存运输】

储存稳定性：-20℃下，12个月稳定；25℃，一周内，无活性损失。缓冲体系：50mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油。反复冻融5次，无活性损失。

运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。

 

【重组肠激酶｜产品优势】

 

特异性：特定的蛋白酶，切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸(DDDDK)。
无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

纯度高：不含其他蛋白酶，无非特异性切割。

符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。

质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

【重组肠激酶｜注意事项】

 

酶切温度：不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。

酶切条件：在＞200mM 咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油条件下，酶切效果受影响，可参照以下推荐方法进行酶切：

 

推荐方法：为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，再进行酶切。若不便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。

如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。

磷酸盐的影响：磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。

去除肠激酶：本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（eg.DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl

酶切效果：蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

 

【重组肠激酶｜相关产品】

 

重组羧肽酶B；序列分析纯胰蛋白酶；重组人胰蛋白酶；重组抑肽酶。