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序列分析纯V8蛋白酶

V8蛋白酶 V813

CAS:66676-43-5  EC:3.4.21.19

 

V8蛋白酶|产品简介

 

酶切位点:V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸(Glutamic acid、E)或天冬氨酸(Aspartic acid、D)残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。

产品应用在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。

基本特性:V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2-巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。

 

V8蛋白酶|产品特性

 

来源

                重组大肠杆菌

产品外观

白色、类白色、类黄色粉末

比活

≥ 5.0 U /mg pro.

蛋白电泳

单一主条带

分子量(蛋白电泳)

24.0±2.4 kDa

备注在25℃,pH7.8的条件下,每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位。

 

V8蛋白酶|使用方法

 

使用前注意:可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
目的蛋白溶解:用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50 mM NH4HCO3  pH 7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。

酶切:V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
 
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)

 

应用举例:重组V8酶切胰岛素
   100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH 8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h,加6 μl磷酸溶液终止反应,C18柱分析:

A:酶切之前

     IMG_256

B:酶切之后

          IMG_257

 

V8蛋白酶|储存运输


储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;

溶解后稳定性:用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;用水或50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;用50 mM Tris-HCl pH 8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。

运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。

 

V8蛋白酶|产品优势

 

序列分析纯胰蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。

质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。

纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。

冻干粉:易于储存和运输。

符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。

质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。


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  • 产品规格
    50ug;100ug;1mg;2mg
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