MR0103 RNase抑制剂，无甘油
产品编码：MR0103
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
储存温度：2- 8℃
有效期：6个月
- 产品描述
雅心RNase抑制剂，无甘油产品是由克隆有该酶编码基因的重组大肠杆菌生产，可与各种商业化的Taq DNA聚合酶、M-MLV逆转录酶或RNA聚合酶兼容使用。本产品通过非共价键以1:1的高亲和力结合RNases A、B、C，特异性抑制这三种RNase的活性，但对RNase 1、RNase T1、S1核酸酶、RNase H或来自Aspergillus的RNase无效。本产品不含有人源RNase inhibitor中对氧化非常敏感的两个半胱氨酸，显著提高了抗氧化能力，这使其在不适宜高浓度DTT的反应中更具优势，如qPCR。本产品中核酸酶、宿主DNA残留量极低，适用于开发预混RT-qPCR试剂。此外，本产品不含甘油，可用于配制冻干试剂。
- 产品组分
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组分 |
包装规格 |
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5 KU （MR01035KU） |
50 KU （MR010350KU） |
100 KU （MR0103100KU） |
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RNase Inhibitor, Glycerol-free (100 U/μL) |
50 μL |
500 μL |
1 mL |
- 注意事项
- 避免RNase污染：保持实验区域洁净；操作时穿戴干净的手套、口罩；所用试剂和耗材均需保证RNase-free。
- 在冰上配制反应液防止RNA降解。
- 操作流程
一步法RT-qPCR
- 配制如下反应混合液
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组分 |
25 μL体系 |
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Nuclease-free Water |
To 25 μL |
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2X One-Step RT-qPCR Buffer |
12.5 μL |
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HotStart Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (10 U/μL) |
1 μL |
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Reverse Transcriptase II, Glycerol-free (200 U/μL) |
0.1 μL |
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RNase Inhibitor, Glycerol-free (100 U/μL) |
0.1 μL |
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Primer/Probe Mix |
1 μL |
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模板 |
X μL |
注意：
- 推荐引物终浓度0.3 μM，可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 推荐探针终浓度0.1 μM，可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加。
- 如需要多重RT-qPCR反应，则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
- 反应程序
推荐一（标准程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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42-55℃ |
15 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ |
1 min |
1 |
预变性 |
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95℃ |
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45 cycles |
变性 |
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60℃ |
60 sec |
退火/延伸 |
推荐二（快速程序）
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温度 |
时间 |
循环数 |
目的 |
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42-55℃ |
5 min |
1 |
逆转录 |
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95℃ |
30 sec |
1 |
预变性 |
|
95℃ |
|
45 cycles |
变性 |
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60℃ |
15-30 sec |
退火/延伸 |
注意：
- 如模板结构比较复杂，如GC含量较高，可将逆转录温度提高到55℃，有助于提高逆转录效率和灵敏度。
- 如模板结构比较复杂，可适当增加预变性和变性时间。
- 可根据客户优化后的条件进行调整。
不同PCR仪器反应条件略有不同，首次使用时请进行条件优化和确认。
