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ZP0204 热启动Taq DNA聚合酶,无甘油

产品编码:ZP0204

来源:基因工程生产,大肠杆菌表达

储存温度:2 - 8℃

有效期:1

 

  1. 产品描述

雅心HotStart Taq DNA Polymerase是雅心Taq和抗Taq抗体经最佳比例混合而成的热启动Taq DNA聚合酶。本制品中Taq酶和抗Taq抗体有很强的亲和力,且在70℃时仍处于完全封闭状态,可在样品配制和体系升温阶段抑制由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。抗Taq抗体在PCR反应最初的DNA预变性阶段已变性,不会影响后续PCR反应的正常进行。

适用于各种基于Taq DNA聚合酶的热启动PCRqPCR,是基于qPCR分子诊断试剂的首选热启动Taq酶,保证PCR体系具有极高的扩增灵敏度和特异性。本产品中核酸酶、宿主DNA残留量极低,适用于开发预混RT-qPCR试剂。此外,本产品不含甘油,可用于配制冻干试剂。

 

  1. 产品组分

组分

产品规格

500 U

ZP0204500U

5 KU

ZP02045KU

10 KU

ZP020410KU

HotStart Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (10 U/μL)

50 μL

500 μL

1 mL

 

 

  1. 注意事项
  • 避免RNase污染:保持实验区域洁净;操作时穿戴干净的手套、口罩;所用试剂和耗材均需保证RNase-free
  • 在冰上配制反应液防止RNA降解。

 

  1. 操作流程
    1. qPCR
  1. 配制如下反应混合液

组分

25 μL体系

Nuclease-free Water

To 25 μL

10X qPCR Buffer

12.5 μL

dNTP Mixture (2.5 mM each)

2 μL

HotStart Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (10 U/μL)

1 μL

Primer/Probe Mix

1 μL

模板

X μL

注意:

  1. 推荐引物终浓度0.3 μM,可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
  2. 推荐探针终浓度0.1 μM,可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加
  3. 如需要多重qPCR反应,则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。
  1. 反应程序

推荐一(标准程序)

温度

时间

循环数

目的

95℃ 

1 min

1

预变性

95℃ 

10 sec

  45 cycles

变性

60℃

60 sec

退火/延伸

 

 

推荐二(快速程序)

温度

时间

循环数

目的

95℃ 

30 sec

1

预变性

95℃ 

5-10 sec

  45 cycles

变性

60℃

15-30 sec

退火/延伸

注意:

  1. 如模板结构比较复杂,可适当增加预变性和变性时间。
  2. 可根据客户优化后的条件进行调整。

 

4.2 一步法RT-qPCR

  1. 配制如下反应混合液

组分

25 μL体系

Nuclease-free Water

To 25 μL

2X One-Step RT-qPCR Buffer

12.5 μL

HotStart Taq DNA Polymerase, Glycerol-free (10 U/μL)

1 μL

Reverse Transcriptase II, Glycerol-free (200 U/μL)

0.1 μL

RNase Inhibitor, Glycerol-free (100 U/μL)

0.1 μL

Primer/Probe Mix

1 μL

模板

X μL

 

注意:

  1. 推荐引物终浓度0.3 μM,可根据实验需求在0.1 - 1 μM范围内调整或根据客户需求添加。
  2. 推荐探针终浓度0.1 μM,可根据实验需求在0.05 - 0.3 μM范围内调整或根据客户需求添加
  3. 如需要多重RT-qPCR反应,则根据需求进行引物浓度和模板浓度优化。

 

  1. 反应程序

推荐一(标准程序)

温度

时间

循环数

目的

42-55 

15 min

1

逆转录

95℃ 

1 min

1

预变性

95℃ 

10 sec

  45 cycles

变性

60℃

60 sec

退火/延伸

 

推荐二(快速程序)

温度

时间

循环数

目的

42-55 

5 min

1

逆转录

95℃ 

30 sec

1

预变性

95℃ 

5-10 sec

  45 cycles

变性

60℃

15-30 sec

退火/延伸

注意:

  1. 如模板结构比较复杂,如GC含量较高,可将逆转录温度提高到55℃,有助于提高逆转录效率和灵敏度。
  2. 如模板结构比较复杂,可适当增加预变性和变性时间。
  3. 可根据客户优化后的条件进行调整。

 

不同PCR仪器反应条件略有不同,首次使用时请进行条件优化和确认。