PNGF04 快速N-糖苷酶F（非还原剂型）

产品编码：PNGF04

储存温度：-20 ± 5℃

有效期：2年

1. 产品描述

雅心快速N-糖苷酶F（非还原剂型）是一种重组表达的酰胺酶，用于快速释放糖蛋白上的 N-连接糖链。该酶由大肠杆菌表达，特异性切割糖蛋白中天冬酰胺（Asn）与 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）之间的β-酰胺键，从而释放完整的N-糖链。

本产品采用非还原反应体系，在无需添加还原剂的条件下即可在50℃ 下10分钟内完成抗体及多种糖蛋白的脱糖反应。该体系可保持抗体二硫键结构完整，适用于完整蛋白分子量分析( intact mass analysis)、糖链标记及LC-MS分析。

核心优势：

50. 极速脱糖： 采用专有优化体系，仅需10分钟即可完成抗体及多种糖蛋白的高效去糖基化。
50. 高效释放糖链： 可高效释放多数常见N-糖位点，有助于获得真实的糖型分布信息。
50. 广泛的底物兼容：高效去除复合型、杂合型及高甘露糖型N-糖链 (不适用于含core α-1,3-岩藻糖修饰的N-糖链)。
50. 下游分析友好： 产物可直接用于后续糖链标记或LC-MS分析。

2. 产品组分

*1: 酶储存液组分为：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM NaCl , 5 mM EDTA

*2: 一个反应单位（1 reaction）定义为：在 1X Fast PNGF Buffer, NR 条件下，于50℃孵育 10 分钟，可实现对10 µg人源IgG 的≥95% 脱糖。

3. 推荐使用方法

雅心快速N-糖苷酶F（非还原剂型）针对底物去糖基化进行了高度优化，建议的操作程序如下 。

1. 准备底物：取10 ug样本，使用超纯水补足体积至8 μL。
2. 配置反应体系：加入2 μL的5X Fast PNGF Buffer, NR，混合均匀，此时总体积为10 μL。
3. 底物预热：在75℃孵育5分钟，随后置于冰上10秒以上降温。
4. 加入酶液：加入1 μL Fast PNGase F。
5. 孵育反应：在 50℃下孵育10分钟。

4. 注意事项

1. 反应终止：如后续实验需要终止酶活，可在75℃下加热10分钟进行灭活。
2. 容器选择：为保证最佳热传导效果，推荐使用 0.2 mL PCR 管，并建议使用带有加热盖的PCR仪进行孵育，以防止管盖冷凝影响反应浓度。
3. 缓冲液兼容性：确保目标蛋白溶解在不含 SDS 的缓冲液中，因为 SDS 会抑制酶活性。同时应避免高浓度的稳定剂（如Tween、Triton X-100、NP-40）或有机溶剂残留。
4. 酶的分装建议：酶首次解冻后，建议小体积进行分装，保存在-20℃，冻融次数小于5次以避免蛋白反复冻融而失去活性。
5. 运输条件：干冰运输