PNGF02 快速N-糖苷酶F
产品编码：PNGF02
储存温度：-20 ± 5℃
有效期：2年
- 产品描述
雅心快速N-糖苷酶F是一种重组表达的酰胺酶，用于快速释放糖蛋白上的 N-连接糖链。该酶由大肠杆菌表达，特异性切割糖蛋白中天冬酰胺（Asn）与 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）之间的β-酰胺键，从而释放完整的 N-糖链。本产品采用还原反应体系，在 50℃ 下10分钟内完成抗体及多种糖蛋白的脱糖反应。该体系可有效打开蛋白结构，提高糖链位点的可及性，从而提升脱糖效率，适用于糖链释放、糖链标记及LC-MS分析。
核心优势：
- 极速脱糖： 采用专有优化体系，仅需10分钟即可完成抗体及多种糖蛋白的高效去糖基化。
- 高效释放糖链： 可高效释放多数常见 N-糖位点，有助于获得真实的糖型分布信息。
- 广泛的底物兼容：高效去除复合型、杂合型及高甘露糖型N-糖链 (不适用于含 core α-1,3-岩藻糖修饰的N-糖链)。
- 下游分析友好： 产物可直接用于后续糖链标记或LC-MS分析。
- 产品组分
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组分编码 |
名称 |
储存温度 |
体积 |
备注 |
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PNGF02-A |
Fast PNGase F*1 |
-20±5℃ |
50 μL |
50 reactions*2 |
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PNGF02-B |
5X Fast PNGF Buffer |
-20±5℃ |
0.2 mL |
专有缓冲液 |
*1: 酶储存液组分为：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM NaCl , 5 mM EDTA
*2: 一个反应单位（1 reaction）定义为：在 1X Fast PNGF Buffer 条件下，于 50℃ 孵育 10 分钟，可实现对 100 µg 人源 IgG 的≥95% 脱糖。
- 推荐使用方法
雅心Fast PNGase F 针对底物去糖基化进行了高度优化，建议根据底物类型选择以下操作程序 。
- 一步法（常规快速程序）
适用于绝大多数常规抗体及重组蛋白的快速去糖基化 。
- 准备底物：取100 ug样本，使用超纯水补足体积至 16 μL。
- 配置反应体系：加入4 μL 的5X Fast PNGF Buffer，混合均匀，此时总体积为 20 μL。
- 加入酶液：加入1 μL Fast PNGase F。
- 孵育反应：在 50℃下孵育10分钟。
- 两步法（针对难解离或特殊位点）
适用于Fab区含有N-糖链或结构极其紧密的特殊抗体，通过短时热变性提升去糖基化效率。
- 底物预热变性： 取少于100 ug抗体样本，使用超纯水补足体积至 16 μL。
加入4 uL 5X Fast PNGF Buffer。在 80℃孵育2分钟，随后置于冰上10秒以上降温。
- 加入酶液： 加入1 uL Fast PNGase F。
- 孵育反应： 在 50℃下孵育10分钟。
- 注意事项
- 反应终止：如后续实验需要终止酶活，可在75℃下加热10分钟进行灭活。
- 容器选择：为保证最佳热传导效果，推荐使用 0.2 mL PCR 管，并建议使用带有加热盖的PCR仪进行孵育，以防止管盖冷凝影响反应浓度。
- 缓冲液兼容性：确保目标蛋白溶解在不含 SDS 的缓冲液中，因为 SDS 会抑制酶活性。同时应避免高浓度的稳定剂（如 Tween、Triton X-100、NP-40）或有机溶剂残留。
- 酶的分装建议：酶首次解冻后，建议小体积进行分装，保存在-20℃，冻融次数小于5次以避免蛋白反复冻融而失去活性。
- 运输条件：干冰运输
