为什么无动物源性?—轮状疫苗病毒事件
摘要：轮状病毒感染性腹泻是婴幼儿急诊和死亡（除呼吸道感染之外）的第二位病因，目前尚无有效的治疗药物。而轮状病毒疫苗是预防轮状病毒感染最经济有效的手段。在疫苗的质量控制中，外源因子是重要的检测指标。在2010年，葛兰素史克和默克世界两大疫苗生产厂商所生产的 RotarixR和RotaTeqR中，均检出有外源因子——猪圆环病毒(PCV)。这是继肠套叠事件之后，轮状病毒疫苗的安全性问题再度成为卫生领域关注的焦点。本次事件中所产生的焦点问题包括 PCV DNA 的来源、PCV 对人类是否致病、疫苗中是否存在完整的 PCV DNA序列和病毒样颗粒、口服疫苗后能否造成人类的感染等安全性问题。GSK公司推测其来自于细胞传代所用的猪源性的胰酶。在疫苗细胞基质制备中胰酶是常用的原料，这对采用细胞基质生产的疫苗的安全问题带来了更多的困惑，同时，公认的检测方法和标准品需要继续完善。
近十年来，国内、欧洲、印度的重组胰岛素、疫苗研发和生产、干细胞培养企业都相继开始换用重组胰蛋白酶，我国药典委员会也委托上海雅心生物技术有限公司开展2020年版《中国药典》中重组胰蛋白酶标准的制定工作，上海雅心是2020版重组胰蛋白酶药典标准制定的承办单位，也是国家重组胰蛋白酶标准品的提供单位。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶完全一致，具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中。
2010 年 3 月，Victoria 等利用宏基因组学和微生物基因组学技术，对包括口服脊髓灰质炎疫苗、 风疹病毒疫苗、麻疹病毒疫苗、黄热病病毒疫苗、水痘病毒疫苗、2种轮状病毒疫苗及麻疹风疹流行性腮腺炎联合疫苗在内的8种减毒活疫苗的检测中发现，在葛兰素史克公司（GSK）生产的轮状病毒 （Rotavirus，RV）疫苗 Rotarix 中存在 1 型猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）的DNA片段。与此同时，FDA 于 2010年3月22日发布消息称在Rotarix中检出了外源性病毒成分，因此，建议暂时停止使用该疫苗。
1.轮状病毒疫苗及猪圆环病毒
现在全球已经批准上市的轮状病毒疫苗包括葛兰素史克（GSK）的 Rotarix、默克 （Merck）的 RotaTeq，兰州生物制品研究所有限责任公司生产的口服轮状病毒减毒活疫苗（Lanzhou lamb rotavirus vaccine，LLR）仅在中国使用。3种轮状病毒疫苗的销售量大，使用的地区范围广，因此，该疫苗污染存在广泛的社会影响和安全隐患。
PCV 是一种无包膜的单链环状 DNA 病毒，呈正二十面体，直径约 20 nm，基因组大小约为1760 nt，包括两个主要的开放读码框（ORF）。PCV最早被发现于传代猪肾细胞（PK-15）。PCV 分为 PCV1 和 PCV2 两型，具有致病性的PCV2与目前认为无致病性的 PCV1的基因同源性仅为 76%，但基因组结构非常相似。包括人、鼠、牛、猪等多种哺乳动物体内均能检测到 PCV 抗体，但PCV对这些动物的致病性尚未确定。
2. PCV 的检测及应对原则
美国 FDA 采取积极措施应对该突发事件。在暂停使用 Rotarix 之后，建议美国 Merck 公司筛查其生产的轮状病毒疫苗 RotaTeq，初步结果显示，RotaTeq 中存在猪圆环病毒 1 型和2型的 DNA片段（疫苗液经20 倍浓缩后检出，原液中 PCV 的DNA片段单位含量接近检测限），该结果也得到了FDA 的证实。在收集了更多的信息并进行了内部实验之后，2010 年 5 月 7 日，FDA 与疫苗及相关生物制品咨询委员会（Vaccines and Related Biological Products Advisory Committee）召开会议，共同研讨此次污染事件。会议介绍了 PCV 意外检出的背景情况，认为现在尚无证据证明 PCV 对人类具有致病性，并讨论了 PCV 的存在对Rotarix和RotaTeq 的使用造成的风险和应对的措施。此次 PCV1 的检出（不止是针对 PCV1）也提示现有的传统检测技术已不能满足生物制品检测的需要。对于人用病毒疫苗生产中所用的细胞介质、 病毒毒种和其他生物原料的分析检测，现已有一些尚未应用的高级分析检测方法，会议也对这些方法的实际应用提出了建议。2010 年 5 月 14 日，FDA 更 新了该事件的后续报道，将“暂停使用 Rotarix”的建议修改为“建议临床重新使用 Rotarix，继续使用 RotaTeq”。修改的依据有三点：
① GSK 和 Merck两公司均有良好的安全记录，并进行过大量的临床试验；
②尚无证据表明 PCV 可对人类安全造成危害；
③使用轮状病毒疫苗带来的益处远高于PCV 存在造成理论上潜在的危害。
FDA 和厂商将继续深入调查并评价各方检测结果。 在中国，中国食品药品检定研究院（National Institutes for Food and Drug Control，NIFDC）获悉此次事件后，及时建立和完善了 PCV 检测技术，对注册检定留样的 2 批 Rotarix 和 RotaTeq 进行了检测，也证明了 Rotarix 中 PCV1 DNA 的存在。应 WHO邀 请，NIFDC 专家于 2011 年 5 月 18 日，赴美国马里兰州巴尔的摩参加了 WHO 关于生物制品中发现外源因子污染后的风险评估指导原则（草案）修订专家会，并作了题为《我国生物制品中外源因子检测与控制现状》的专题报告。随后于 5 月 19 日至 5 月 21 日，应邀参加了国际生物制品标准化协会（International Alliance for Biological Standardization，IABS）召开的关于外源因子检测新技术和风险评估的学术研讨会。
3.重组胰蛋白酶替代动物源性胰蛋白酶用于生物制药中
近十年来，国内、欧洲、印度的重组胰岛素、疫苗研发和生产、干细胞培养企业都相继开始换用重组胰蛋白酶，我国药典委员会也委托上海雅心生物技术有限公司开展2020年版《中国药典》中重组胰蛋白酶标准的制定工作，上海雅心是2020版重组胰蛋白酶药典标准制定的承办单位，也是国家重组胰蛋白酶标准品的提供单位。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的胰蛋白酶完全一致，具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中。
