雅心重组抑肽酶（RTI16）与sigma提取抑肽酶（A1153）比较

一、实验目的

比较雅心重组抑肽酶（货号RTI16，批号：RTI161101）与sigma抑肽酶（货号A1153, 批号:SLBP2656V ）在比活性、吸光度、酸度、纯度等方面的异同。

二、实验方法

1、蛋白含量、比活性、吸光度测定，酸度检测

称取一定量的两种酶的粉末，分别用纯水溶解，配制成2.5mg/ml的酶液 ，按照吸光系数法测定蛋白含量，其中A_280nm，1cm（1mg/ml）=0.84，活性测定按照SOP操作，计算比活性。将酶液稀释成3EPU/ml，277nm下测定吸光度，要求不大于0.8。测定酶液的酸度。

2、HPLC纯度测定

①选择分子筛分析柱为TSK-GEL G2000SWXL

②该柱子的pH范围为2.5-7.5，速度范围为0.5-1.0ml/min（最高可为1.2），温度范围10-30℃，洗脱液盐浓度小于0.5M

③检测波长280nm

④根据以上两点设计方法如下表：

方法	pH	流速ml/min	温度℃
分子筛	5.8	1	25

⑤其他方法按照液相SOP进行操作

⑥上样量均是20ug

⑦样品处理：纯水溶解冻干粉

三、实验结果

1、蛋白含量、比活性、吸光度和酸度

	蛋白含量	比活性EPU/mg	吸光度	酸度pH
雅心RTI	72%	3.71	0.505	5.0-7.0
Sigma抑肽酶	76.9%	3.56	0.526	5.0-7.0

2、HPLC纯度

①雅心重组抑肽酶（RTI161101）

②sigma提取抑肽酶（货号A1153，lot number:SLBP2656V）

 

四、实验结论

1.两种蛋白在蛋白含量、比活性、吸光度和酸度方面都基本一致，其中雅心重组抑肽酶（RTI161101）比活性略高于sigma抑肽酶（A1153）。

2.HPLC纯度：雅心重组抑肽酶（RTI161101）比sigma抑肽酶（A1153）峰形更集中，两者纯度均为100%。