重组肠激酶在2-8℃条件下14天的稳定性
一、试剂
试剂A. 25 mM Tris HCl Buffer, pH 8.0 at 25°C (称取Tris 0.303gr, 溶解在80ml 纯化水中, 25°C,用2mol/LHCl 调pH 8.0,加纯化水至100ml.)
试剂B. 重组肠激酶酶液
2-8°C保温箱保存的三个批次的重组肠激酶:REK161101 (10U/µl),
REK161002(10U/µl), REK160901(10U/µl).
试剂C. 底物溶液
底物蛋白溶液: 50μg/支, 1mg/ml, 储存在 -80°C.
二、活性测定
用试剂A稀释REK 溶液至0.1 unit /μl,取1 µl 至底物溶液中50µl (50μg/支, 1mg/ml).混匀,25 °C酶切14-16h, SDS-PAGE分析酶切结果。
单位定义:1U定义为在25℃,12h~16h之内,将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
三、操作步骤
稳定性研究:将重组肠激酶溶液储存在密封避光2 - 8℃冰箱中,分别在第1,3,5,7和14天时测定酶活性; 取三批次的平均值作为检测结果。
四、结果
结果如图1和图2所示:
重组肠激酶溶液在密封避光2 - 8℃冰箱中保存14天后,稳定无活性损失。
图1重组肠激酶在2 - 8℃下14天内的活性变化曲线
活性是在第1,3,5,7和14天时测定,结果为三批次的平均值
图2 重组肠激酶在2 - 8℃下第14天时的SDS-PAGE活性分析
Lane 1, 底物; Lane2, 批次:REK161101 ; Lane 3, 批次:REK161002;
Lane 4, 批次:REK160901.
2019年11月5日 11:17
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