重组Kex2蛋白酶反复冻融稳定性声明

 

一、试剂

供试品：重组Kex2蛋白酶（冻干粉），批号：Re170601；

测活缓冲液：50mM Tris-HCl+2mM CaCl2，pH8.0；

溶解缓冲液：20mM  NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2。

 

二、仪器设备

TU-1901双光速紫外可见分光光度计； 

SW-CJ-1D型单人净化工作台。 

 

三、实验方法 

供试品的配制：取供试品适量，用20mM NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2溶解至1mg/ml，取1mg/ml的供试品溶液用20mM NaAc-HAc，2mM CaCl2，pH 5.2稀释8X，稀释过程中动作轻柔，避免气泡的产生，所有操作均在超净台中进行。 

活性测定：对蛋白进行反复冻融后测定活性，进行3次重复活性测定。  

保存条件：-20℃以下。

 

三、实验步骤

取光程为1cm的带盖石英比色杯，加入25℃预热过的3ml 底物溶液，按“紫外分光光度法操作规程”在405nm的波长处，调零。取供试品溶液10.0μl加入，立即计时并摇匀，在405nm的波长处测定吸光度值，每隔20s读取吸光度，共2min。 

 

四、蛋白比活计算 

 

五、实验结果： 

 

六、总结： 

Kex2反复冻融3次之后活性开始有所下降，下降到一定程度之后活性开始稳定。Kex2反复冻融5次之后活性基本稳定，比活符合标准。