重组胰蛋白酶细胞消化液的选择及在细胞培养液中的应用

细胞消化液	时间/min	消化完全细胞/%	生长状态
PBS+1kU	7	86	好
PBS+2kU	6	80	好
PBS+5kU	4.5	50	不好
PBS+10kU	3	42	不好
PBS+0.01%EDTA+1kU	3	90	好
PBS+0.01%EDTA+2kU	2	96	好
PBS+0.01%EDTA+5kU	1.8	35	不好
PBS+0.01%EDTA+10kU	1.5	20	不好

表1 不同细胞消化液的细胞消化时间及消化后和转接培养后的生长状态

由表1可见，第一组细胞消化液是单独使用RPT 消化贴壁细胞，在PBS+1KU和PBS+2KU组的消化时间很慢（6min以上），且由于时间过长，致使细胞损害，细胞传代后不能正常生长；随着RPT活性增加到5kU和10kU,消化时间缩短，但细胞毒性增加，所以RPT不能单独使用。第二组细胞消化液是RPT和EDTA配合使用，消化时间缩短，消化后和转接培养后细胞状态较好。由于EDTA是化学螯合剂，主要螯合Ca²⁺，Mg²⁺，使细胞分离，细胞毒性小，能帮助RPT消化细胞。根据消化时间，消化后细胞生存能力和转接后生长状态，最终确定活性2KU/ml的PBS+0.01%EDTA细胞消化液最合适，见图1。

图1 细胞消化前后形态

a. Hela细胞消化前的形态；

b. Hela细胞消化后的形态正常，细胞分离完全（消化时间：2min）；

c.转接培养24h后的生长状态正常。