PNGF2130 重组N-糖苷酶F

重组N-糖苷酶F

Recombinant PNGase F

Cat. No.：PNGF2130

储存温度：-20 ± 5℃保存

复验期：2年

1. 产品描述

雅心N-糖苷酶F (PNGase F) 是一种有效的酰胺酶，由克隆有该酶编码基因的重组大肠杆菌生产。它可切割糖蛋白上的N-糖链，有助于生成具有二-N-乙酰基壳二糖单元的无碳水化合物的肽和寡糖。N-糖苷酶F是从糖蛋白中去除几乎所有N-糖链的最有效的方法。产品可以从抗体及其融合蛋白上去除所有复合型、杂合型及高甘露糖型糖链，但如果核心结构上有α-1,3-连接的岩藻糖残基（经常出现于植物及昆虫细胞中表达的免疫球蛋白），则不能切割。在尽可能短的时间内获得准确的N-糖链分布对有效的过程控制至关重要。N-糖苷酶F是经过优化的试剂，能够在几分钟之内迅速地将抗体和融合蛋白去糖基化。所有的N-糖链都能快速无偏好地释放出来，并可直接进行下游的层析或质谱分析，进而快速的对糖基化抗体确定糖型。

2. 产品组分

规格：30 μL

3. 活性定义

单位酶活定义为在10 μL反应体系、37°C条件下，在1小时内从10 μg变性 RNase B中除去超过95%的糖链所需要的酶量。

4. 推荐使用方法

（1）变性条件下的反应条件

对于有些糖基化抗体，需要将样品变性处理后才能完全去糖基化，步骤如下：

1. 用去离子水溶解1-20 μg的抗体或糖蛋白，用去离子水定容到9 μL，再加入1 μL的10X Buffer 2， 最后的总体积为10 μL。
2. 100°C孵育 10 min后在冰上冷却，然后离心10秒钟。
3. 加入2 μL的10X Buffer 1, 2 μL 10% NP-40，6 μL的去离子水，最终的体积为20 μL。
4. 加入 1μL的 PNGase F，轻轻吹打混匀。
5. 37°C孵育 1小时。
6. 评估去糖基化程度的最简单方法是通过 SDS-PAGE 胶图观察目的蛋白的迁移变化。

（2）非变性条件下的反应条件

1. 用去离子水溶解1-20 μg的抗体或糖蛋白，加入2 μL的10X Buffer 1，最终的体积为20 μL。
2. 加入 2-5 μL的 PNGase F，轻轻吹打混匀;
3. 37°C孵育 4-24小时。 注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。
4. 估去糖基化程度的最简单方法是通过 SDS-PAGE 胶图观察目的蛋白的迁移变化。