测序级蛋白酶

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V8蛋白酶
V8蛋白酶

Cat.No.:66676-43-5
EC3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶;金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶;谷氨酰胺内切酶;天冬酰胺内切酶
储存条件:冻干粉,2-8℃
来源基因工程生产,大肠杆菌表达。
 
1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。
 
2.产品特性
来源 重组大肠杆菌
产品外观 白色、类白色、类黄色粉末
比活 ≥ 5.0 AU /mg pro.
蛋白电泳 单一主条带
分子量 24.0±2.4 kDa
单位定义:在25℃,pH7.8的条件下,每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位。

3.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;
溶解后稳定性:用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
 
4.推荐使用方法
1)使用前注意
可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
 
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)
变性剂 浓度 残余酶活
不添加 0 100%
尿素 2M 95%
5M 12%
8M 0
SDS 0.1% 90%
0.5% 80%
1% 50%
2)应用举例:重组V8酶切胰岛素
   100 μl胰岛素溶液+198 μl 0.4 M Tris-HCl pH8.0+60 μl 0.1%V8蛋白酶液+超纯水补至400 μl。37 ℃水浴反应2 h,加6 μl磷酸溶液终止反应,C18柱分析:
                              A:酶切之前                                                          B:酶切之后
 
 
5.产品优势
序列分析纯蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产 品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉:易于储存和运输。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
 
6.相关产品
重组肠激酶;
序列分析纯羧肽酶B;
序列分析纯胰蛋白酶;
序列分析纯糜蛋白酶。
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