重组蛋白酶

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产品信息•重组蛋白酶

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重组肠激酶
特异性高,纯度高
重组肠激酶

Cat.No.: REK08
CAS: 9017-74-8
EC: 3.4.21.9
储存温度:-20℃或以下
来源:重组牛肠激酶,大肠杆菌表达
蛋白序列氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致。
 
1.产品简介
雅心重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经HPLC纯化,纯度高,特异性高,不含其他蛋白酶。肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸(DDDDK)。可以在较宽pH范围(4.5-9.5)和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签。
 
2.产品特性
来源 重组大肠杆菌
外观 澄清、无色至淡黄色液体
活性 ≥ 5.0 U/µl
纯度(蛋白电泳) 单一主条带
电泳(分子量) 25.8 ±2.58 kDa
单位定义:1U定义为在25℃,12h~16h之内,将0.5mg保存于25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割95%所需的酶量。
                                                                                                                
3.推荐使用方法
1)25℃酶切条件:
按照酶活性定义,酶切条件举例:
25mM Tris-HCl 8.0体系中:
融合蛋白  0.1-1mg/ml(蛋白总量50-100µg)
重组EK   0.1-0.2U
25℃过夜酶切,或完全酶切需16-24h,用SDS-PAGE
检测酶切效果。
2)4℃低温酶切条件:
4℃能对底物进行有效酶切,但需要将酶切时间延长至48-64h,或增加2-3倍酶量。
3)酶切优化和放大
优化:可以对酶切条件进行优化,例如缓冲液pH,融合蛋白浓度,EK的量,以及酶切时间,使融合蛋白能在稳定条件下被酶切,用SDS-PAGE检测酶切效果。
放大:选择优化后的反应条件,按该条件等比例放大,用SDS-PAGE检测酶切效果。
4)去除重组肠激酶的方法:使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析(例如sigma T0637)去除重组肠激酶。
5)注意:不建议37℃条件下酶切,可能会有非特异性酶切出现。
 
4.常见影响肠激酶活性的因素
在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切:
1)为获得理想酶切结果,请将样品透析到25mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,再进行酶切。
2)若不便透析,可将样品稀释,咪唑含量在100mM以下,NaCl浓度在50mM以下,甘油浓度小于5%以下进行酶切,酶的用量与蛋白的比例不变(即1U酶切500µg蛋白)。
3)如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种,且不便去除,此时适当增加酶量或延长酶切时间,也可达到较好酶切效果。

5.储存和运输稳定性
酶液储存稳定性:-20℃,24个月稳定;25℃,一周内,无活性损失。缓冲体系:50mM Tris-HCl,pH8.0,250mM NaCl,2mMCa2+,50%甘油。
酶液反复冻融稳定性:反复冻融5次,无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,稳定。
 
6.产品优势
特异性:特定的蛋白酶,切割前面含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端位点:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸 (DDDDK)。
纯度高:不含其他蛋白酶,无非特异性切割。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产品批次间无差异,质量稳定。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2008质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
 
7.相关产品
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